德晟告訴您如何制作TAE緩沖區
TAE緩沖液是由Tris堿乙酸和EDTA(Tris-acetate-EDTA)組成的溶液它是用分析PCR擴增DNA純化方案或DNA克隆實驗產生的DNA產物的瓊脂糖凝膠電泳最常用的緩沖液
該緩沖劑具有低離子強度和低緩沖能力它最適合大型(> 20千堿基)DNA的電泳需要經常更換或循環使用更長的時間(> 4小時)考慮到這一點就要考慮制作多個批次的緩沖區
鑒于緩沖區易于制造且步驟易于快速執行因此一次生產多個批次會效率更高按照以下說明只需30分鐘即可制作TAE緩沖區
TAE緩沖區需要準備什么
由于制作TAE緩沖區僅需要快速簡單的指令因此所需的材料數量并不太多只需要EDTA(乙二胺四乙酸)二鈉鹽Tris堿和冰醋酸
制備緩沖液還需要適當的pH計和校準標準需要600毫升和1500毫升的燒杯或燒瓶量筒離子水攪拌棒和攪拌盤
特別說明公式重量(每個元素的原子質量乘以原子數然后將每個原子的質量相加)縮寫為FW
提前準備EDTA將pH值調節到8.0否則EDTA不會完全溶解對于0.5毫升(摩爾或濃度)EDTA的500毫升儲備溶液稱出93.05克EDTA二鈉鹽(FW = 372.2)將其溶于400毫升去離子水中并用氫氧化鈉(NaOH)調節pH值加滿溶液至最終體積為500毫升
庫存解決方案
①稱量242克Tris堿(FW = 121.14)并將其溶解在大約750毫升的去離子水中制成TAE的濃縮(50x)儲備液小心加入57.1毫升冰酸和100毫升0.5 M EDTA(pH 8.0)
②將溶液調整至最終體積為1升該儲備溶液可以在室溫下保存此緩沖液pH值應約為8.5
③準備TAE緩沖液的工作溶液通過在去離子水中簡單地將儲備溶液稀釋50倍即可制成1倍TAE緩沖液的工作溶液最終溶質濃度為40 mM(毫摩爾)三乙酸鹽和1 mM EDTA現在可以使用該緩沖液運行瓊脂糖凝膠了
在開始確定庫存之前請先檢查庫存以確保上述用于TAE緩沖器的所有材料供應人員可以提前列出所有物品